ELISA，即酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），自1971年由Engvall等人首创以来，已逐渐成为生物医学研究中不可或缺的工具。基于免疫组化中的酶免疫分析方法，ELISA采用固相免疫测定的形式，能够有效探测体液中微量且关键的生物标志物。继免疫荧光和放射免疫技术之后，ELISA因其独特优势迅速崛起，在临床检验领域占据了重要地位，成为生物医学研究中的重要工具。

ELISA的基本原理

ELISA是一种基于免疫反应的高灵敏度实验技术，其基本原理是利用抗原与抗体的特异性反应，结合酶对底物的高效催化作用，来检测靶蛋白的含量。实验过程中，需要将抗原或捕获抗体包被于固相载体上，借助检测分子（如酶或荧光基团），将化学信号转化为电信号，最终用于对靶蛋白的定量分析。

ELISA的分类

ELISA可以用于同时测定抗原和抗体。根据实验原理及操作的不同，ELISA大致可以分为四类：直接法、间接法、夹心法和竞争法。

直接法（Direct ELISA）

直接法将抗原或抗体固定在酶标板上，随后加入带有酶标记的一级抗体或一级抗原与之特异性结合，再通过酶催化底物显色，从而测定总靶标蛋白的含量。

间接法（Indirect ELISA）

间接法通常用于检测抗体。将抗原固定在酶标板上，加入一抗后，与抗原特异性结合，再加入带有酶标记的二抗，使二抗与一抗特异性结合。最后加入底物，使底物与酶反应显色，便可测定总靶标蛋白的含量。

夹心法（Sandwich ELISA）

夹心法分为双抗体夹心法和双抗原夹心法，适用于检测具有多个识别位点的大分子蛋白等。双抗体夹心法通常用于检测抗原，通过将抗体固定在固相载体上，加入待测抗原与之特异性结合，然后添加酶标抗体检测并利用底物显色，来测定总靶标蛋白的含量。双抗原夹心法与之类似，采用固相抗原和酶标特异性抗原来测定样品中的抗体。

竞争法（Competitive ELISA）

竞争法适用于测定只有一个识别位点的小分子物质。其原理为标本中的抗原与一定量的酶标抗原竞争性地结合于固相抗体。抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原就越少，最终显色也越浅。需注意，显色结果与待检抗原或抗体的量成反比。

四种ELISA方法的比较

了解ELISA的基本原理、分类及不同方法的特点，有助于我们根据实际需求选择最合适的检测方案，从而提高实验的准确性和效率。更多ELISA实验干货，欢迎关注人生就是博-尊龙凯时！